細(xì)胞內(nèi)存在許多復(fù)雜的調(diào)控系統(tǒng),其中蛋白酶起著至關(guān)重要的作用。蛋白酶抑制劑作為一類重要的生物活性分子,具有調(diào)節(jié)蛋白酶活性的能力,對(duì)于細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)、生命活動(dòng)等起著不可忽視的影響。
蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團(tuán)結(jié)合,使蛋白酶活力下降,甚至消失,但不使酶蛋白變性的物質(zhì)。從放線菌發(fā)酵液中分離到亮肽素、抗痛素、糜蛋白酶抑素、抑彈性蛋白酶醛、抑胃蛋白酶素、磷酰胺素等,能分別抑制胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、胃蛋白酶、金屬蛋白酶等各種蛋白酶。都屬于蛋白酶抑制劑。
破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放出蛋白酶,這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中,需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn),因?yàn)楦鞣N蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同,因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低,尤其應(yīng)注意在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑時(shí)應(yīng)充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。
根據(jù)蛋白酶抑制劑的來源和作用方式,可以將其分為以下幾類:
1.天然抑制劑:天然界存在著許多具有抑制蛋白酶活性的分子,如酪蛋白、胰島素和血漿酶等。它們以天然蛋白質(zhì)的形式存在于生物體內(nèi),通過與蛋白酶結(jié)合來抑制其活性。
2.人工合成抑制劑:科學(xué)家通過化學(xué)合成的方式,創(chuàng)造出一類具有特定結(jié)構(gòu)和功能的抑制劑。這些抑制劑可以針對(duì)特定的蛋白酶進(jìn)行設(shè)計(jì),以實(shí)現(xiàn)更精確的調(diào)控。
3.基因工程抑制劑:利用基因工程技術(shù),將抑制劑的基因?qū)爰?xì)胞中,使其在細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá)。這種方式可以實(shí)現(xiàn)對(duì)特定蛋白酶的持續(xù)抑制,從而對(duì)細(xì)胞功能進(jìn)行更深入的研究。