在高效液相分析檢測樣品的過程中,高效液相色譜柱會受到來自于樣品及色譜系統(tǒng)的污染,從而導(dǎo)致色譜柱耐用性差、壽命縮短。
來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指,HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒,以及流動相系統(tǒng)過濾不*殘留的固體顆粒。來自于樣品的污染主要指,未*溶解的樣品或者已*溶解的樣品進入色譜系統(tǒng)中,由于樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異,導(dǎo)致沉淀析出污染系統(tǒng)。
特別是對于中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體及生物藥品的檢測,因基質(zhì)的復(fù)雜性,高效液相色譜柱受污染的情況會更加嚴重。污染會導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷、填料變色等,從而帶來檢測成本高,測試結(jié)果不準確等各種影響。
保護柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材,使用保護柱可大大降低分析柱受污染的程度,延長高效液相色譜柱使用壽命。
保護柱位于進樣器與分析柱之間,作用主要兩方面:
1.截留不溶性顆粒
2.吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)
如何選擇保護柱?
1.保護柱的填料,與分析柱保持一致!填料品牌一致,才能100%確保選擇性一致。
2.保護柱的規(guī)格,要與分析柱匹配!填料粒徑一致,保護柱的內(nèi)徑與分析柱的內(nèi)徑相近。
3.對于精細分離,保護柱本身的裝填柱效要足夠好!
4.對于精細分離或者小內(nèi)徑色譜柱分離,保護柱的連接死體積要盡可能小。
5.如果是用于UHPLC柱,還要考慮保護柱的耐壓能力。
高效液相色譜柱不理想,就會導(dǎo)致峰擴散,分離度下降,不利于精細分離。